色譜柱的清潔與再生
在色譜柱的溶劑入口端收集強吸附物質,在許多情況下,洗滌過程中使用反向流動是有益的。與人們普遍認為的相反,逆流永遠不會損害填料良好的色譜柱。提到的流動方向通常是色譜柱*初填充的方向。請注意,不規則/無定形原始二氧化硅在逆流時可能會出現問題,因為可能會重新構造填充床。 當在這些不規則二氧化硅上反轉流動時,應始終格外小心。
請檢查我們針對不同固定相( 建議的再生程序, RP、NP、離子交換等 ) 并在這些程序后執行 CoA 色譜柱測試,如果原始壓力恢復,以評估色譜柱性能/峰對稱性。
清洗和再生程序
如果足夠小心,就可以在很長一段時間內保持柱效和可靠性。 本節旨在提供有關有助于延長 HPLC 色譜柱壽命的不同程序的信息。
清潔與再生的區別
我們通常假設,分離后,柱或筒中*初存在的所有物質都已洗脫。運行后,在開始新的分離之前,用2-3柱體積的初始溶劑混合物清洗色譜柱。 但是,如果流動相成分的強度不足以在常規運行期間將其洗脫,則一些強烈保留在色譜柱上的雜質將在進樣口處積聚。 發生這種情況時可能會出現一些不可忽視的問題:性能損失、背壓增加、峰拖尾、保留時間偏移或基線漂移。 為避免這種情況,強烈建議在出現任何這些癥狀之前定期清潔色譜柱。 這個過程很簡單,不需要修改通常的色譜設置。 當清潔不充分時,可能需要進行更徹底的處理,即再生,以避免丟棄色譜柱。
再生議建的清潔和程序
使用的清潔程序越多,所需的條件就越不嚴格。 應在色譜柱儲存之前或色譜柱似乎堵塞時執行再生程序。 流速通常設置為低于分離期間的流速( 通常為 20% 至 50% )。
色譜柱體積( 包括填料體積 ),單位為 mL = π x [色譜柱半徑,單位為厘米] 2 x [色譜柱長度,單位為厘米]