請檢查我們針對不同固定相( 建議的再生程序, RP、NP、離子交換等 ) 并在這些程序后執行 CoA 色譜柱測試,如果原始壓力恢復,以評估色譜柱性能/峰對稱性。
1.清洗和再生程序
如果足夠小心,就可以在很長一段時間內保持柱效和可靠性。 本節旨在提供有關有助于延長 HPLC 色譜柱壽命的不同程序的信息。
2.清潔與再生的區別
我們通常假設,分離后,柱或筒中*初存在的所有物質都已洗脫。運行后,在開始新的分離之前,用2-3柱體積的初始溶劑混合物清洗色譜柱。 但是,如果流動相成分的強度不足以在常規運行期間將其洗脫,則一些強烈保留在色譜柱上的雜質將在進樣口處積聚。 發生這種情況時可能會出現一些不可忽視的問題:性能損失、背壓增加、峰拖尾、保留時間偏移或基線漂移。 為避免這種情況,強烈建議在出現任何這些癥狀之前定期清潔色譜柱。 這個過程很簡單,不需要修改通常的色譜設置。 當清潔不充分時,可能需要進行更徹底的處理,即再生,以避免丟棄色譜柱。
3.建議的清潔和再生程序
使用的清潔程序越多,所需的條件就越不嚴格。 應在色譜柱儲存之前或色譜柱似乎堵塞時執行再生程序。 流速通常設置為低于分離期間的流速( 通常為 20% 至 50% )。
色譜柱體積( 包括填料體積 ),單位為 mL = π x [色譜柱半徑,單位為厘米] 2 x [色譜柱長度,單位為厘米]
色譜柱
|
較好的清潔程序
|
較好的再生程序
|
Silia Chrom 高效液相色譜柱
|
- 設置流量( 通常的 20% 到 50% ) - 用 2-3 倍柱體積的以下每種溶劑沖洗
|
- 反吹色譜柱 - 設置流量( 通常的 20% 到 50% ) - 用 10 倍柱體積的以下每種溶劑沖洗
|
反相柱 ( C18、C8、C4、C1、胺、氰基、苯基、PFP等 )
|
- 水/乙腈 (95/5) 以去除緩沖液 - 水/乙腈 (5/95) - 分離過程中使用的流動相
|
- 水/乙腈 (95/5) - 四氫呋喃 - 水/乙腈 (5/95) - 分離過程中使用的流動相
|
正相柱 ( 胺、氰基、二醇等 ) 注意:切勿用水。
|
- MeOH/CHCl 3 (50/50) - 乙酸乙酯 - 分離過程中使用的流動相
|
- MeOH/CHCl 3 (50/50) - 異丙醇和乙酸乙酯 - 分離過程中使用的流動相
|
非鍵合硅膠柱 ( 二氧化硅 )
|
- 己烷、異丙醇和二氯甲烷 - 分離過程中使用的流動相
|
- 己烷、異丙醇和二氯甲烷 - 分離過程中使用的流動相
|
離子交換柱 ( SCX、SAX 等 )
|
- 5 mM 磷酸鹽緩沖液 pH 7.00 - 醋酸/水 (10/90) - 水、甲醇和水
|